BOD的测定方法包括标准稀释法、生物传感器法、活性污泥曝气降解法和测压法。
这种方法是最经典的也是最常用的方法。简单地说，就是测定在20℃±1℃温度下培养 5d前后溶液中溶氧量的差值。求出来的BOD值称为“五日生化需氧量（BOD5）”。
其原理是以一定的流量使水样及空气进入流通量池中与微生物传感器接触，水样中溶解性可生化降解的有机物受菌膜的扩散速度达到恒定时，扩散到氧电极表面上的氧质量也达到恒定并且产生一恒定电流。由于该电流与水样中可生化降解的有机物的差值与氧的减少量有定量关系，据此可算出水样的生化需氧量。通常用BOD5标准样品对比，以换算出水样的BOD5的值。
控制温度为30～35℃，利用活性污泥强制曝气降解样品2h，经重铬酸钾消解生物降解后的样品，测定生物降解前后的化学需氧量，其差值即为BOD。根据与标准方法的对比实验结果，可换算成为BOD5值。
在密闭的培养瓶中，水样中溶解氧被微生物消耗，微生物因呼吸作用产生与耗氧量相当的CO2，当CO2被吸收后使密闭系统的压力降低。根据压力测得的压降可求出水样的BOD值。
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